产品简介

NADP苹果酸脱氢酶(NADPMDH)测试盒微量法公司正在出售的产品：禽白血病/肉瘤病毒PCR检测试剂盒副鸡禽杆菌PCR检测试剂盒疱疹病毒PCR检测试剂盒双芽巴贝斯虫PCR检测试剂盒牛巴贝斯虫PCR检测试剂盒驽巴贝斯虫PCR检测试剂盒犬巴贝斯虫PCR检测试剂盒分歧巴贝斯虫PCR检测试剂盒马巴贝斯虫PCR检测试剂盒大巴贝虫PCR检测试剂盒莫氏巴贝斯虫PCR检测试剂盒羊巴贝斯虫PCR检测试剂盒

NADP苹果酸脱氢酶(NADPMDH)测试盒微量法

本公司所有产品仅供科学实验，不做其他科学实验外的使用！
商品属性：

测定意义：

MDH （EC 1.1.1.37）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，线粒体中MDH是TCA循环的关键酶之一，催化苹果酸形成草酰乙酸；相反，胞浆中MDH催化草酰乙酸形成苹果酸。草酰乙酸是重要的中间产物， 连接多条重要的代谢途径。因此，MDH在细胞多种生理活动中扮演着重要的角色，包括线粒体的能量代谢、 苹果酸-天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。根据不同的辅酶特异性，MDH分为NAD-依赖的MDH和NADP-依赖的MDH， NADP-MDH主要存在于真核细胞中。
测定原理：
NADP-MDH催化NADPH还原草酰乙酸生成苹果酸，导致340nm处光吸收下降。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。

试剂的组成和配制：

试剂一、提取液 100 mL×1 瓶，在 4℃保存；

试剂二、液体 20 mL×1 瓶，在 4℃保存；

试剂三、粉剂×1 瓶，-20℃保存；

样本测定的准备：

1、细菌、细胞或组织样品的制备：

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量

（104个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，

加入 1mL 试剂一），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样品：直接检测。

测定步骤:

1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。

2、检测工作液的配制：用时在试剂三中加入 19mL 试剂二和 0.5mL 蒸馏水，充分混匀待用；

用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；

3、测定前将检测工作液在 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 10min 以上。

4、在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 5μL 样本和 195μL 工作液，混匀后立即记录 340nm

处 20s 时的吸光值 A1 和 1min20s 后的吸光值 A2，计算 ΔA=A1-A2。

注意：若 A1-A2 大于 0.5，需将酶液用提取液稀释，使 A1-A2 小于 0.5，可提高检测灵敏度。

计算公式中乘以相应稀释倍数。

NADP-MDH 活力单位的计算：

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、血清（浆）NADP-MDH 活力的计算

单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟消耗 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。

NADP-MDH（nmol/min/mL）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷V 样÷T=6430×ΔA

2、组织、细菌或细胞中 NADP-MDH 活力的计算:

（1）按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。

NADP-MDH（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr

（2）按样本鲜重计算：

单位的定义：每 g 组织每分钟消耗 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。

NADP-MDH（nmol/min/g 鲜重）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷（W ×V 样÷V 样总）÷T=6430×ΔA÷W

（3）按细菌或细胞密度计算：

单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟消耗 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。

NADP-MDH（nmol/min/104cell）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷（V样÷V样总×500）÷T=12.86×ΔA

V 反总：反应体系总体积，2×10-4L；ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×103L / mol /cm；d：

比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.005 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：

反应时间，1 min；W：样本质量，g；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；500：细胞或细菌总数，500 万。

b.用 96 孔板测定的计算公式如下

1、血清（浆）NADP-MDH 活力的计算

单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟消耗 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。

NADP-MDH（nmol/min/mL）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷V 样÷T=12860×ΔA

2、组织、细菌或细胞中 NADP-MDH 活力的计算:

（1）按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。

NADP-MDH（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=12860×ΔA÷Cpr

（2）按样本鲜重计算：

单位的定义：每 g 组织每分钟消耗 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。

NADP-MDH（nmol/min/g 鲜重）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷（W× V 样÷V 样总）÷T=12860×ΔA÷W

（3）按细菌或细胞密度计算：

单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟消耗 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。

NADP-MDH（nmol/min/104cell）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷（500×V样÷V样总）÷T=25.72×ΔA

V 反总：反应体系总体积，2×10-4L；ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×103L / mol /cm；d：96 孔板光径，0.5cm；V 样：加入样本体积，0.005 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；

T：反应时间，1 min；W：样本质量，g；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；500：细胞或细

菌总数，500 万。

生化试剂盒的使用注意事项：

选择合适的试剂盒：根据实验目的和检测对象选择合适的试剂盒，确保实验的准确性和可靠性。

严格遵循说明书：按照试剂盒的说明书进行操作，避免误用或浪费。

注意保存条件：按照试剂盒的保存条件进行妥善保存，避免阳光直射、高温或潮湿等不利因素。

控制实验条件：在实验过程中严格控制实验条件，如温度、时间、pH值等，以确保实验结果的稳定性。

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1、订购前,请与销售员核对产品中文名称/CAS号/英文名称等。

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