产品简介

NADP苹果酸酶(NADPME)测试盒微量法的相关产品：丙酮酸激酶(PK)测试盒紫外分光光度法丙酮酸羧化酶(PC)测试盒微量法丙酮酸脱氢酶(PDH)测试盒微量法丙酮酸脱氢酶(PDH)测试盒可见分光光度法丙酮酸脱羧酶(PDC)测试盒微量法丙酮酸脱羧酶(PDC)测试盒紫外分光光度法

商品属性：

测定意义：

ME 广泛存在于微生物、培养细胞、动物和植物胞浆中,尤其在植物组织中活性较高。ME 催化苹果酸氧化脱羧的可逆反应,产CO2,以及伴随 NAD(P)+的还原反应,是苹果酸代谢的关键酶。ME 活性与生物合成和抗氧化密切相关。近年来植物 ME 活性为抗氧化研究的热点。根据辅酶专一性和对底物特异性的不同,可将 ME 分为 NAD-ME(EC1.1.1.38)和 NADP-ME(EC1.1.1.4

测定原理:

NADP-ME 催化 NADP+还原成 NADPH,在 340nm 下测定 NADPH 增加速率。

需自备的仪器和用品:

紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板和蒸馏水。

试剂的组成和配制：

提取液:100mL×1 瓶,4℃保存。;

试剂一:液体 30mL×1 瓶,4℃保存;

试剂二:粉剂×1 瓶,-20℃保存; 临用前加入 20mL 试剂一充分振荡,溶解待用,用不完的试剂分装后-20度保存,禁止反复冻融。

试剂三:粉剂×1 瓶,-20℃保存;临用前加入 2.5mL 蒸馏水充分振荡,溶解待用,用不完的试剂分装后-20度保存,禁止反复冻融。

组织样本的前处理：

1、细菌、细胞或组织样品的制备:

细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);14000g 4℃离清,置冰上待测。

组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。14000g 4上清,置冰上待测。

2、血清(浆)样品:直接检测。

测定步骤：

1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 340nm,蒸馏水调零。

2、在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 样本和 170μL 试剂二,混匀,30℃孵育 5min,加入 20μL试剂三,混匀后立即记录

光值 A1 和 1min 后的吸光值 A2,计算 ΔA=A2-A1。

NADP-ME 活性计算:

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

(1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟生成 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。

NADP-ME(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样×Cpr) ÷T= 3215×ΔA÷Cpr此法需要自行测定样本蛋白质浓度

(2)按样本鲜重计算:

单位的定义:每 g 组织每分钟生成 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。

NADP-ME(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W× V 样÷V 样总) ÷T = 3215×ΔA÷W

(3)按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟生成 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。

NADP-ME(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(500×V 样÷V 样总) ÷T =6.43×ΔA

V 反总:反应体系总体积,2×10-4 L;ε:NADPH 摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.0

提取液体积,1 mL;T:反应时间,1 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500 万。

b.用 96 孔板测定的计算公式如下

(1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟生成 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。

NADP-ME(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V 样) ÷T= 6431×ΔA÷Cpr此法需要自行测定样本蛋白质浓度。

(2)按样本鲜重计算:

单位的定义:每 g 组织每分钟生成 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。

NADP-ME(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样÷V 样总×W) ÷T = 6431×ΔA÷W

(3)按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟生成 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。

NADP-ME(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样÷V 样总×500) ÷T =12.86×ΔA

V 反总:反应体系总体积,2×10-4 L;ε:NADPH 摩尔消光系数,6.22×103 L / mol/cm;d:96 孔板光径,0.5cm;V 样:加入样本体积,0

入提取液体积,1 mL;T:反应时间,1 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500 万

生化检测试剂盒实验操作说明：

一、抗氧化系列生化检测试剂盒

包括氧化酶（XO）活性分析、超氧阴离子清除能力分析、葡萄糖氧化酶活性（GOD）检测、总抗氧化能力（TAC）检测、植物原花青素(OPC)含量检测、植物类黄酮含量检测、植物总酚（TP）含量检测试剂盒。

氧化酶（XO）活性分析试剂盒为例，提供了一种简单易用的比色分析法，用于测定各种样品中的XO活性，特点是测定血清，血浆，组织/细胞裂解物和其他生物体液中的氧化酶活性，以及广泛的检测范围：15.6 -500 mU/mL。

二、氧化系列生化检测试剂盒

包括过氧化氢酶 (CAT) 活性分析、过氧化氢（H2O2）检测、脂质过氧化(丙二醛) 分析、蛋白质羰基含量检测、超氧阴离子含量检测等试剂盒。

蛋白质羰基含量检测试剂盒（比色法）为例，提供了一种简单易用的比色法，用于分析不同生物样品（细胞/组织裂解液，生物液体）中蛋白质羰基含量。在370 nm处有特征吸收峰。

特点是：1.测定组织样本、细胞、细菌、血清等中的蛋白质羰基含量。2.样本处理、实验步骤以及结果计算更加详尽准确精炼。3.保质期长。

三、抗逆系列生化检测试剂盒

包括超氧化物歧化酶 (SOD) 活力检测、羟自由基清除能力分析、多酚氧化酶（PPO）活性检测、过氧化物酶(POD)活性检测等试剂盒。

超氧化物歧化酶 (SOD) 活力检测试剂盒为例，提供一种简单易用的比色测定法，用于定量测定血清，血浆，组织/细胞裂解液和其它生物体液中的SOD酶活性。

特点是：1.测定血清，血浆，组织/细胞裂解物和其他生物体液中的SOD酶活性。2.通过WST-8法测定SOD活性，zui大抑制率可接近100％，不受一些常见干扰因素的干扰。3.广泛的检测范围：3.13- 200U/mL。

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