产品简介

RPMI-1640 培养基公司正在出售的产品：胞J.gamma1(STR鉴定正确)昆虫RNA柱式提取试剂盒人结肠腺癌细胞LS1034 (STR鉴定正确)粪便RNA柱式提取试剂盒人鼻咽癌细胞C666-1(STR鉴定正确)动物RNA提取试剂盒(柱式Trizol)小鼠乳腺癌细胞 EMT-6（种属鉴定）液体样品RNA提取试剂盒人食管鳞癌细胞Kyse520 (STR鉴定正确)动物RNA提取

RPMI-1640 培养基

RPMI 1640培养液是由Moor等研究成功的，最初为培养小鼠白血病细胞的需要而准备。开始的配方特别适合悬浮细胞的生长，主要针对淋巴细胞，后经多次改良从RPMI 1630、1634，而至RPMI 1640。其组成较为简单，但可以适应很多种类细胞的生长。不仅肿瘤细胞，而且很多正常组织细胞可用RMPI 1640进行体外培养。实验室一般将RPMI 1640作为实验和细胞维持的基本培养液，目前RPMI 1640是应用最为广泛的培养基之一。

应用：

1、用于人类白血病细胞悬浮液单层细胞培养。

2、用于疫苗企业病毒株的传代培养供后续抗原的制备。

3、用细胞培养基础液。

4、用于动物疫病病毒采样及病毒分离和维持液的基础液。

注意事项

仅限科研用。

培养体系中的一些组分是对人体健康有害的物质，请不要用暴露的皮肤接触培养体系的液体和有培养体系的液体残留的容器内部；这部分有害物质的浓度和危害性都较低，如有接触，立即用自来水冲洗即可。

复苏

1) 将恒温水浴锅中的水预热到 37℃；

2) 准备一支 15ml 离心管，加入 5ml 含 10%FBS 的培养基，放入 37℃水浴锅中预热；

3) 戴上护目镜，厚毛线手套后，从液氮罐中取出要复苏的细胞，尽快转入 37℃恒温水浴锅中

复温晃动冻存管以提高复温速率；

4) 将融化了的冻存管中的细胞吸入事先准备的离心管中，混匀后，1000rpm 离心 5min；

5) 准备一个 T-25 培养瓶，写上细胞名称、日期，再加入 4ml 培养基；

6) 离心完成后弃去上清，用 1ml 培养基重悬细胞后，转入 T-25 细胞培养中，混匀后转入

CO2 培养箱中培养静置。

传代 （细胞传代建议一传二）

1) 当细胞汇合度达到 85%以上时，可进行传代。

2) 在生物安全柜内，打开培养瓶瓶口，收集瓶内的培养基；

3) 向培养瓶内加入 3ml 无菌的 1×PBS 后，水平放置培养瓶，使PBS 能够浸润到培养瓶底面上所有的面积，吸弃 PBS；

4) 向瓶内加入消化液 1ml，浸润底面后放入 37℃ CO2培养箱中孵育 1~2min；

5) 孵育完成后在倒置显微镜下观察细胞是否变圆飘起，若全部消化下来则直接向培养瓶内加入2ml 含 10%FBS 的培养基中，将悬液吸入 15ml 离心管；

① 准备一个无菌的 15ml 离心管，加入 2ml 含 10%FBS 的培养基；

② 将消化下来的细胞吸入①中的离心管内中和（避免吹打③）；向之前消化的培养瓶中加入 1ml 继续消化 2min 左右，轻拍培养瓶，95%左右细胞脱。

6) 1000rpm 离心 5min；

7) 准备两个新的 T-25 培养瓶，各加入 4ml培养基。

8) 离心完成后，弃上清，用 2ml 培养基重悬离心细胞，将重悬后的细胞转入 2 个 T-25 培养瓶，每个培养瓶各 1ml；

9) 水平放置培养瓶，震荡混匀后，将培养瓶置于 37℃，5%CO2培养箱中静置培养。

冻存 （细胞冻存建议每瓶 T25 冻一支）

1）~6）参照传代步骤

7）离心完成后，弃上清，用 1mL 冻存液重悬细胞沉淀，然后转入 1.8ml 冻存管中；

8）将冻存管转入填充满异丙醇的程序降温盒中，之后转入-80℃冰箱中过夜降温；

9）第二天，取出降温完成的序降温盒中的冻存管，尽快转入液氮罐中保存。

‌无菌操作‌：细胞培养需在无菌环境下进行，使用前需对超净工作台进行紫外线照射灭菌，定期清洁培养箱。实验人员需更换工作服、鞋套，戴口罩、手套。

‌器材灭菌‌：玻璃器皿、金属器械等可采用高压蒸汽灭菌，塑料制品则多选择环氧乙烷灭菌或购买已灭菌产品。

‌试剂选择‌：所用培养液、血清、缓冲液等试剂应无菌、无污染，使用前需进行无菌检测。不同细胞对培养液成分要求有差异，应按细胞类型选择合适培养液。

‌培养条件‌：多数哺乳动物细胞适宜培养温度为37℃，偏差应控制在±0.5℃。培养箱应保持良好密封性，定期检查气体浓度与流量，细胞培养通常需5%CO2以维持培养液pH值稳定。培养箱内湿度应保持在95%左右。

‌日常观察‌：每天在显微镜下观察细胞形态、生长状态与培养液颜色变化。

‌定期检测‌：定期对细胞进行支原体、细菌、真菌等污染检测。