产品简介

NAD苹果酸脱氢酶(NADMDH)测试盒微量法的相关产品：二氢黄酮醇还原酶(DFR)测试盒微量法二氢黄酮醇还原酶(DFR)测试盒可见分光光度法非蛋白质巯基测试盒微量法非蛋白质巯基测试盒可见分光光度法辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒微量法辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒可见分光光度法

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

商品属性：

测定意义：

MDH （EC 1.1.1.37）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，线粒体中MDH是TCA循环的关键酶之一，催化苹果酸形成草酰乙酸；相反，胞浆中MDH催化草酰乙酸形成苹果酸。草酰乙酸是重要的中间产物， 连接多条重要的代谢途径。因此，MDH在细胞多种生理活动中扮演着重要的角色，包括线粒体的能量代谢、 苹果酸-天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。根据不同的辅酶特异性，MDH分为NAD-依赖的MDH和NADP-依赖的MDH，细菌中通常只含有NAD-MDH，在真核细胞中，NAD-MDH分布于细胞质和线粒体中。
测定原理：
NAD-MDH催化NADH还原草酰乙酸生成苹果酸，导致340nm处光吸收下降。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。 

试剂的组成和配制：

试剂一、提取液 100 mL×1 瓶，在 4℃保存；

试剂二、液体 20 mL×1 瓶，在 4℃保存；

试剂三、粉剂×1 瓶，-20℃保存；

组织样本的前处理：

1、细菌、细胞或组织样品的制备：

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量

（104个）：试剂一体积（mL）为 1000~2000：1 的比例（建议 2000 万细菌或细胞加入 1mL试剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，

加入 1mL 试剂一），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样品：直接检测。

测定步骤：

1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。

2、检测工作液的配制：用时在试剂三中加入 19mL 试剂二和 0.5mL 蒸馏水，充分混匀待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。；

3、测定前将检测工作液在 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 10min 以上。

4、在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 5μL 样本和 195μL 工作液，混匀后立即记录 340nm

处 20s 时的吸光值 A1 和 1min20s 后的吸光值 A2，计算 ΔA=A1-A2。

注意：若 A1-A2 大于 0.5，需将样本用提取液稀释，使 A1-A2 小于 0.5，可提高检测灵敏度。

计算公式中乘以相应稀释倍数。

NAD-MDH 活力单位的计算：

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、血清（浆）NAD-MDH 活力的计算

单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。

NAD-MDH（nmol/min/mL）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109

]÷V 样÷T=6430×ΔA

2、组织、细菌或细胞中 NAD-MDH 活力的计算:

（1）按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。

NAD-MDH（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109

]÷(V 样×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr

（2）按样本鲜重计算：

单位的定义：每 g 组织每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。

NAD-MDH（nmol/min/g 鲜重）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109

]÷（W× V 样÷V 样总）÷T

=6430×ΔA÷W

（3）按细菌或细胞密度计算：

单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。

NAD-MDH（nmol/min/104

cell）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109

]÷（2000×V样÷V样总）÷T=3.215×ΔA

V 反总：反应体系总体积，2×10-4

L；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×103

L / mol /cm；d：

比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.005 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：

反应时间，1 min；W：样本质量，g；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；2000：细胞或细菌

总数，2000 万。

b.用 96 孔板测定的计算公式如下

1、血清（浆）NAD-MDH 活力的计算

单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。

NAD-MDH（nmol/min/mL）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109

]÷V 样÷T=12860×ΔA

2、组织、细菌或细胞中 NAD-MDH 活力的计算:

（1）按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。

NAD-MDH（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109

]÷(V 样×Cpr) ÷T=12860×ΔA÷Cpr

（2）按样本鲜重计算：

单位的定义：每 g 组织中每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。

NAD-MDH（nmol/min/g 鲜重）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109

]÷（W× V 样÷V 样总）÷T

=12860×ΔA÷W

（3）按细菌或细胞密度计算：

单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。

NAD-MDH（nmol/min/104

cell）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109

]÷（2000×V 样÷V 样总）÷T=6.43×ΔA

V 反总：反应体系总体积，2×10-4

L；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×103

L / mol /cm；d：96 孔板光径，0.5cm；V 样：加入样本体积，0.005 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；

T：反应时间，1 min；W：样本质量，g；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；2000：细胞或细菌总数，2000 万。

生化检测试剂盒实验操作说明：

一、抗氧化系列生化检测试剂盒

包括氧化酶（XO）活性分析、超氧阴离子清除能力分析、葡萄糖氧化酶活性（GOD）检测、总抗氧化能力（TAC）检测、植物原花青素(OPC)含量检测、植物类黄酮含量检测、植物总酚（TP）含量检测试剂盒。

氧化酶（XO）活性分析试剂盒为例，提供了一种简单易用的比色分析法，用于测定各种样品中的XO活性，特点是测定血清，血浆，组织/细胞裂解物和其他生物体液中的氧化酶活性，以及广泛的检测范围：15.6 -500 mU/mL。

二、氧化系列生化检测试剂盒

包括过氧化氢酶 (CAT) 活性分析、过氧化氢（H2O2）检测、脂质过氧化(丙二醛) 分析、蛋白质羰基含量检测、超氧阴离子含量检测等试剂盒。

蛋白质羰基含量检测试剂盒（比色法）为例，提供了一种简单易用的比色法，用于分析不同生物样品（细胞/组织裂解液，生物液体）中蛋白质羰基含量。在370 nm处有特征吸收峰。

特点是：1.测定组织样本、细胞、细菌、血清等中的蛋白质羰基含量。2.样本处理、实验步骤以及结果计算更加详尽准确精炼。3.保质期长。

三、抗逆系列生化检测试剂盒

包括超氧化物歧化酶 (SOD) 活力检测、羟自由基清除能力分析、多酚氧化酶（PPO）活性检测、过氧化物酶(POD)活性检测等试剂盒。

超氧化物歧化酶 (SOD) 活力检测试剂盒为例，提供一种简单易用的比色测定法，用于定量测定血清，血浆，组织/细胞裂解液和其它生物体液中的SOD酶活性。

特点是：1.测定血清，血浆，组织/细胞裂解物和其他生物体液中的SOD酶活性。2.通过WST-8法测定SOD活性，zui大抑制率可接近100％，不受一些常见干扰因素的干扰。3.广泛的检测范围：3.13- 200U/mL。

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