产品简介

肠道病毒EV71核酸检测试剂盒是即用型PCR试剂盒的改良产品，含有Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR增强剂、上样染料等所有PCR所需要的成分，用户只需加入模板和引物即可进行PCR反应，具有广泛的用途。

肠道病毒EV71核酸检测试剂盒使用及效果：

将压碎的一小片重量约在100mg左右的植物种子（约1/4黄豆大小）或直径约为0.5-0.7cm（或面积相当的其他形状）的植物叶片直接加到新鲜配制的0.1mL溶液A中，95℃保温10-15分钟，加入0.1mL溶液B，混匀，直接取上清液（相当于PCR体积的1/10）作为模板进行PCR。剩余样品可以放4℃保存。

样本采集、存放及运输：

1、样本采集：各类型样本按照常规方法采集；

2、存放：样本在2~8℃条件下保存应不超过72h，-70℃以下可长期保存，但应避免反复冻融（最多冻融3次）；

3、运输：采用泡沫箱加冰密封进行运输。

普通PCR反应流程：

自备物品：

15毫升锥形离心管：用于制备样品的容器

比色皿：用于比色的容器

96孔酶标板：用于比色的容器

分光光度仪：用于比色分析

酶标仪：用于微量样品比色分析

储存条件：14℃或－20℃

准备物品

清理液（A）毫升

染色液（t B）微升

稀释液（C）毫升

溶解液（tD）毫升

产品说明书1份

反应五要素：

参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：

①引物长度：15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增跨度：以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。

③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。

⑤引物3'端的碱基，特别是末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。

⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。

⑦引物的特异性：

引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。

引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以低引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。