产品简介

半胱氨酰亚砜裂解酶(CSL)测试盒微量法公司正在出售的产品：人疱疹病毒型PCR检测试剂盒人免疫缺陷病毒型通用PCR检测试剂盒人免疫缺陷病毒型群PCR检测试剂盒人免疫缺陷病毒型群型PCR检测试剂盒人免疫缺陷病毒型组前病毒PCR检测试剂盒人免疫缺陷病毒型PCR检测试剂盒人偏肺病毒PCR检测试剂盒人乳头瘤病毒通用·PCR检测试剂盒人副流感病毒型PCR检测试剂盒人副流感病毒通用PCR检测试剂盒人鼻病毒PC

半胱氨酰亚砜裂解酶(CSL)测试盒微量法

本公司所有产品仅供科学实验，不做其他科学实验外的使用！
商品属性：

测定意义：

半胱氨酰亚砜裂解酶（CSL）广泛存在于百合科葱属(如大蒜和洋葱)，十字花科芸薹属
(如卷心菜，菜花，西兰花)，以及豆科中的合金欢属中，并通常被称为蒜氨酸酶(Alliinase)。香菇酸在γ-谷氨酰转肽酶和半胱氨亚砜裂解酶的作用下转化成香菇精，以及产生丙酮酸、乙醛、甲醛和NH3。CSL是内源性甲醛生成的关键酶之一，测定CSL活性对于研究食品安全具有重要意义。
测定原理
CSL催化S-甲基-L-半胱氨亚砜反应产生丙酮酸，与2,4-二硝基肼反应，在碱性条件下显棕红色，在510nm下有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器
天平、研钵、离心机、酶标仪、96孔板、恒温水浴锅、蒸馏水。

试剂的组成和配制:

提取液一：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。

提取液二：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：粉剂×1 瓶，-20℃保存；

试剂二：液体 20mL×1 瓶，4℃保存；

试剂三：液体 14uL×1 支，4℃保存；

组织样本的前处

①总 GAPDH 酶提取：建议称取约 0.1g 样本，加入 1mL 提取液一，冰浴匀浆后超声破碎（冰浴，200W，破碎 3s，间歇 7s，总时间 1min），然后 4℃，8000g 离心 10min，取上清测定。

②胞浆和叶绿体 GAPDH 酶的分离：按照植物组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5～10的比例（建议称取约 0.1g 样本，加入 1mL 提取液一），冰浴匀浆后于 4℃，200g 离心 5min，弃沉淀，取上清4℃，8000g 离心 10min，取上清用于测定胞浆 GAPDH 酶活性，取沉淀加 1mL 提取液二，震荡溶解后超声破碎（冰浴，200W，破碎 3s，间歇 7s，总时间 1min），然后 4℃，8000g 离心 10min，取清测定叶绿体中 GAPDH 酶活性。建议测定总 GAPDH 酶活性，按照步骤①提取粗酶液，若需要分别测定胞浆和叶绿体中的GAPDH，则按照步骤②提取粗酶液。细菌或培养细胞的前处理先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

测定步骤:

1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。

2、 样本测定

（1）工作液的配制：将试剂二全部倒入试剂一瓶中，充分溶解，37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)预热 10 分钟；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

（2）在试剂三中加入 500μL 蒸馏水，充分混匀待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

（3）在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 5μL 样本、5μL 试剂三和 190μL 工作液，混匀，加入最后一个试剂的同时开始计时，记录 340nm 处 20s 时的吸光值 A1 和 5min20s 后的吸光值 A2，计算 ΔA=A1-A2。

GAPDH 活性计算

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

（1）按样本蛋白浓度计算

单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。GAPDH（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=1286×ΔA÷Cpr

（2）按样本鲜重计算

单位的定义：每 g 组织每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。GAPDH（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(W ×V 样÷V 样总) ÷T=1286×ΔA÷W

（3）按细菌或细胞密度计算

单位的定义：每一万个细菌或细胞每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。GAPDH（nmol/min/104cell）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(500 ×V 样÷V 样总) ÷T=2.572×ΔA

V 反总：反应体系总体积，2×10-4L；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×103L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.005 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。

b.用 96 孔板测定的计算公式如下

（1）按样本蛋白浓度计算

单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。GAPDH（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=2572×ΔA÷Cpr

（2）按样本鲜重计算

单位的定义：每 g 组织每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。GAPDH（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(W ×V 样÷V 样总) ÷T=2572×ΔA÷W

（3）按细菌或细胞密度计算

单位的定义：每一万个细菌或细胞每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。GAPDH（nmol/min/104cell）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(500 ×V 样÷V 样总) ÷T=5.144×ΔA

V 反总：反应体系总体积，2×10-4L；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×103L / mol /cm；d：96 孔板光径，0.5cm；V 样：加入样本体积，0.005 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。

生化试剂盒的使用注意事项：

选择合适的试剂盒：根据实验目的和检测对象选择合适的试剂盒，确保实验的准确性和可靠性。

严格遵循说明书：按照试剂盒的说明书进行操作，避免误用或浪费。

注意保存条件：按照试剂盒的保存条件进行妥善保存，避免阳光直射、高温或潮湿等不利因素。

控制实验条件：在实验过程中严格控制实验条件，如温度、时间、pH值等，以确保实验结果的稳定性。

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