产品简介

WEHI 164 (鼠纤维肉瘤细胞)的相关*：RNA分析试剂专题
甲醛变性RNA垂直电泳全套试剂盒 10次
北方杂交印迹消除试剂盒 20次
3’末端RNA同位素（[γ32P]ATP）激标记试剂盒 10次
RNA聚丙烯酰胺凝胶电泳试剂盒 10次
同位素RNA北方杂交试剂盒 5次

实验要点及说明：

1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；

2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理；

3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；

4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；

5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

产品属性： 

商品介绍：

冷冻保存细胞之方法？

冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。

冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；

二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

 EPHA2 基因全长ORF克隆

 EPHB3 基因全长ORF克隆

 EIF5 基因全长ORF克隆

 GBP2 基因全长ORF克隆

 CKMT1A 基因全长ORF克隆

 MVK 基因全长ORF克隆

 SLITRK6 基因全长ORF克隆

 SAE1 基因全长ORF克隆

 PARVA 基因全长ORF克隆

 TBCA 基因全长ORF克隆

WEHI 164 (鼠纤维肉瘤细胞)250mL RNase-Free SSC（无RNase的SSC）,20X   RNase-Free SSC,20X   常温保存

1 管 BL21(AI)大肠杆菌 BL21(AI) E.coli Strain -80℃保存

2 ug pQETirs-system pQETirs-system 低温运输，-20℃保存

HBI霍乱弧菌生化鉴定条(SN)  5条/盒

2 ug pcDNA3.1 pcDNA3.1 低温运输，-20℃保存

YGC琼脂 YGC Agar 250g

2 ug pLVX-DsRed-Express2-C1 pLVX-DsRed-Express2-C1 低温运输，-20℃保存