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产品简介
小鼠表皮角化上皮细胞的相关*：猪白介素13(IL-13)免疫试剂盒*直销猪白介素12(IL-12/P70)免疫试剂盒进口、组装猪白介素12(IL-12/P40)免疫试剂盒进口、分装猪白介素10(IL-10)免疫试剂盒现货供应猪白介素1(IL-1)免疫试剂盒*直销
| 品牌 | 其他品牌 | 货号 | GOY-01X1315 |
|---|---|---|---|
| 规格 | 5×10⁵Cells/T25培养瓶 | 供货周期 | 现货 |
| 主要用途 | 产品仅供科研使用 | 应用领域 | 化工 |
实验要点及说明：
1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；
2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理；
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
产品属性：
产品名称 | 规格 | 货号 |
| 小鼠表皮角化上皮细胞 | 5×10⁵Cells/T25培养瓶 | GOY-01X1315 |
商品介绍：
名称 小鼠表皮角化上皮细胞 2.组织来源：皮肤组织 3.产品规格：5×105cells/T25细胞培养瓶 4.细胞简介： 小鼠表皮角化细胞分离自皮肤组织；表皮位于动物皮肤的外层，由胚胎时期外胚层形成，具有抗摩擦和抗损伤的作用。表皮是皮肤的浅层结构，由复层扁平上皮构成。从基底层到表面可分为五层，即基底层、棘层、颗粒层、透明层和角质层。表皮角化细胞（KC）是构成表皮的主要细胞成分，在体内处于不断增殖过程中，分裂的角化细胞主要位于其基底层，少数位于棘细胞层。随着向表层的推移，细胞的分化程度逐渐增加，并丧失分裂活性。 5.方法简介： 实验室分离的小鼠表皮角化上皮细胞先中性蛋白酶消化、后胰蛋白酶-胶原酶混合消化法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。 6.质量检测： 实验室分离的小鼠表皮角化上皮细胞经PCK免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 7.培养信息： 包被条件鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2） 培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等 产品货号CM-M215 换液频率每2-3天换液一次 生长特性贴壁 细胞形态上皮细胞样 传代特性可传1-2代左右 消化液0.25%胰蛋白酶 培养条件气相：空气，95%；CO2，5% |
冷冻保存细胞之方法？
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
小鼠 E-Selectin / CD62e / SELE 细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
小鼠 IFNA14 / Interferon alpha-14 细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
小鼠 CES3 / Carboxylesterase-3 / CES1D 细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
RAB27B 细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
GPHA2 / Glycoprotein hormone alpha 2 细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
KCT2 / C5orf15 细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
GALNT2 / GalNAc-T2 细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
COL5A2 细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
PNLIPRP1 / PLRP1 细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
SMR3B 细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
小鼠表皮角化上皮细胞1-丁基-3-甲基咪唑六氟盐 97%肼黄 85%Anti-Phospho-5-Lipoxygenase (Ser271) /FITC 荧光素标记化5-脂氧合抗体IgG
1-丁基-3-甲基咪唑氯盐 97%柯衣定 ARAnti-Phospho-5-Lipoxygenase (Ser663) /FITC 荧光素标记化5-脂氧合抗体IgG
1-丁基-3-甲基咪唑三氟甲磺酸盐 97%香紫苏内酯 97%Anti-5-HTT/SERT/FITC 荧光素标记5-羟色转运蛋白抗体IgG
1-丁基-4-甲基吡六氟盐 99%S-联萘酚 99%Anti-8-OHdG/FITC 荧光素标记兔抗8-羟基脱氧鸟苷蛋白抗体IgG
冠6烯 98%双(二苯基膦) 98%Anti-AACT-Alpha1 /RBITC 红色荧光素罗丹明标记α-1抗胰糜蛋白IgG
冠-8-烯 90%1,2-双(二苯基膦)乙烷 98%Anti-AACT-Alpha1/FITC 荧光素标记α-1抗胰糜蛋白
环己硫 98%1,1'-双(二-叔丁基膦基)二茂铁 98%Anti-AAK1/FITC 荧光素标记AP2关联激1抗体IgG
4-氯吡-2-甲酸甲酯 98%1,5-双(二苯基膦)戊烷 97%Anti-AARS2/FITC 荧光素标记氨酰tRNA合成2抗体IgG
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