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小鼠表皮黑色素细胞

产品简介

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产品厂地:上海市
更新时间:2025-02-25
厂商性质:经销商
访问量:270
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品牌其他品牌货号GOY-01X1011
规格5×10⁵Cells/T25培养瓶供货周期现货
主要用途产品仅供科研使用应用领域化工

冷冻保存细胞之方法?

冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ (-20 ℃30 分钟*) → -80 ℃16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 长期储存。

冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时, 以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。

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产品属性:   

产品名称

规格

货号

小鼠表皮黑色素细胞

5×10⁵Cells/T25培养瓶

GOY-01X1011

商品介绍:

名称    小鼠表皮黑色素细胞   

2.组织来源:皮肤组织

3.产品规格:5×105cells/T25细胞培养瓶

4.细胞简介:

小鼠表皮黑色素细胞分离自皮肤组织;表皮位于动物皮肤的外层,由胚胎时期外胚层形成,具有抗摩擦和抗损伤的作用。表皮是皮肤的浅层结构,由复层扁平上皮构成。从基底层到表面可分为五层,即基底层、棘层、颗粒层、透明层和角质层。黑色素细胞是皮肤产生和维持色素的主要细胞,起源于神经嵴,后逐渐迁移到表皮和毛囊。黑色素细胞的异常或功能的失常导致了一系列难治性色素性疾病的发生,如黄褐斑等。表皮黑色素细胞主要分布于位于表皮的基底层,与表皮细胞共同组成表皮黑素单位,其主要功能是产生黑素小体保护皮肤免受损害。

5.方法简介:

实验室分离的小鼠表皮黑色素细胞先中性蛋白酶消化、后胰蛋白酶-胶原酶混合消化法制备而来,细胞总量约为5×10?cells/瓶。

6.质量检测:

实验室分离的小鼠表皮黑色素细胞S-100免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1HBVHCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

7.培养信息:

培养基含FBS、生长添加剂、PenicillinStreptomycin

产品货号CM-M099

换液频率每2-3天换液一次

生长特性贴壁

细胞形态长梭形

传代特性可传1-2

消化液0.25%胰蛋白酶

培养条件气相:空气,95%CO25%

 

实验要点及说明:

1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法;

2.所使用的盖玻片应该为优质玻璃,并经过铬酸洗液处理;

3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻;

4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率;

5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

实验报告:

一、分离与培养:

1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,将成1mm3左右大小;

2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;

3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化;

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;

5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;

二、免疫荧光鉴定:

1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;

2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;

5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;

6、用PBS冲洗3次,每次10min,在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

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