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品牌 | 其他品牌 | 货号 | GOY-01X1191 |
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规格 | 5×10⁵Cells/T25培养瓶 | 供货周期 | 现货 |
主要用途 | 产品仅供科研使用 | 应用领域 | 化工 |
产品属性:
产品名称 | 规格 | 货号 |
大鼠脊髓成纤维细胞 | 5×10⁵Cells/T25培养瓶 | GOY-01X1191 |
商品介绍:
名称 大鼠脊髓成纤维细胞 2.组织来源:脊髓组织 3.产品规格:5×105cells/T25细胞培养瓶 4.细胞简介: 大鼠脊髓成纤维细胞分离自脊髓组织;脊髓是细细的管束状的神经结构,位于脊柱的椎管内且被脊椎保护;是源自脑的中枢神经系统延伸部分。中枢神经系统的细胞依靠复杂的联系来处理传递信息。脊髓的主要功能是传送脑与外周之间的神经信息。人和脊椎动物中枢神经系统的一部分,在椎管里面,上端连接延髓,两旁发出成对的神经,分布到四肢、体壁和内脏。脊髓的内部有一个H形(蝴蝶型)灰质区,主要由神经细胞构成;在灰质区周围为白质区,主要由有髓神经纤维组成;脊髓是许多简单反射的中枢。脊髓两旁发出许多成对的神经(称为脊神经)分布到全身皮肤、肌肉和内脏器官。脊髓是周围神经与脑之间的通路,也是许多简单反射活动的低级中枢。按脊神经的出入可把脊髓也分为相应的31节,31对脊神经就是由不同的脊椎发出的。成纤维细胞(Fibroblast)是疏松结缔组织的主要细胞成分,由胚胎时期的间充质细胞分化而来;成纤维细胞较大,轮廓清楚,多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构,其细胞核呈规则的卵圆形,核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛,细胞质嗜弱碱性,具明显的蛋白质合成和分泌活动,在一定条件下,它可以实现跟纤维细胞的互相转化;成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的脊髓成纤维细胞呈圆形、折光性良好,悬浮于培养基中。30min细胞贴壁,其中部分开始伸出伪足,表现为小的突起;6h后细胞基本贴壁*,伸展成梭形,胞核清晰,分布较均匀,散在生长,不聚集成团;细胞生长迅速,5-7天即呈融合状态,细胞排列紧密,有的交叉重叠生长,平坦、胞体较大,细胞质透明,细胞核较大,呈椭圆形,颜色淡。细胞融合,并彼此连接成网状;细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。脊髓成纤维细胞在生理条件下的主要功能包括:构造和维持组织的正常形态;合成和释放细胞外基质;组织损伤后及时大量聚集修复损伤组织。 5.方法简介: 实验室分离的大鼠脊髓成纤维细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合酶消化后差速贴壁制备而来,细胞总量约为5×10?cells/瓶。 6.质量检测: 实验室分离的大鼠脊髓成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 7.培养信息: 培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等 产品货号CM-R167 换液频率每2-3天换液一次 生长特性贴壁 细胞形态成纤维细胞样 传代特性可传5代左右;3代以内状态最佳 消化液0.25%胰蛋白酶 培养条件气相:空气,95%;CO2,5% |
冷冻保存细胞之方法?
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ (-20 ℃30 分钟*) → -80 ℃16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时, 以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
实验要点及说明:
1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法;
2.所使用的盖玻片应该为优质玻璃,并经过铬酸洗液处理;
3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻;
4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率;
5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,将成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
MMP-14 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带FLAG标签
Pleiotrophin / PTN 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带His标签
Pleiotrophin / PTN 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带FLAG标签
MDK / NEGF2 转录变体2 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带His标签
E-Cadherin 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带FLAG标签
eIF2a 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带Myc标签
CD137 / 4-1BB / TNFRSF9 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带HA标签
大鼠 BMPR1A 基因全长ORF克隆 (表达载体), 无标签
小鼠 SIRT3 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带His标签
小鼠 SIRT3 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带FLAG标签
大鼠脊髓成纤维细胞N-叔丁氧羰基-N'-氧蒽基-L-天门冬酰 98%间二甲苯 99.0%Anti-Phospho-SGK1 (Ser422) /FITC 荧光素标记化糖皮质调节激1抗体IgG
Boc-L-天冬4-环己酯 99%间二甲苯 CP,95.0% Anti-Phospho-SGK1 (Thr256)/FITC 荧光素标记化糖皮质调节激1抗体IgG
Boc-L-天冬4-甲酯 98%间二甲苯 AR,98%Anti-Shadow/SPRN/FITC 荧光素标记新朊蛋白/朊蛋白相关蛋白/沙杜(Shadoo)蛋白抗体IgG
Boc-L-赖 98%间二甲苯标准溶液1mg/ml,溶剂:甲,水质分析Anti-Shank1/FITC 荧光素标记shank-1抗体IgG
BOC-D-脯 98%邻二甲苯 Standard for GC,≥99% (GC)Anti-SHBG /FITC 荧光素标记性结合球蛋白抗体IgG
BOC-L-甲酯 99%邻二甲苯 for HPLC,≥96.0% (GC)Anti-Shh/FITC 荧光素标记Shh信号转导通路膜蛋白受体抗体IgG
O-苄基-L- 98%邻二甲苯 CPShiga-like toxin IIe variant subunit A/FITC 荧光素标记抗猪水肿病大肠杆菌志贺样素Ⅱ型突变体(O139菌株)抗体IgG
BOC-L-羟脯 98%邻二甲苯 98.0%Anti-SHC/FITC 荧光素标记SH2结构域转化蛋白1抗体IgG