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产品名称

名称    脑动脉血管内皮细胞

2.组织来源：脑动脉组织

3.产品规格：5×105cells/T25细胞培养瓶

4.细胞简介：

人脑动脉血管内皮细胞分离自脑动脉组织；脑动脉有成对的颈内动脉和椎动脉互相衔接成动脉循环；静脉系多不与同名动脉拌行，所收集的静脉血先进入静脉窦再汇入颈内静脉；各级静脉都没有瓣膜，它包括脑的动脉系统和脑的静脉系统。脑动脉血管内皮细胞主要功能：①维持血管内外的动态平衡；②合成和分泌细胞因子和介质；③维持凝血和纤溶的动态平衡。

5.方法简介：

实验室分离的人脑动脉血管内皮细胞采用胶原酶-中性蛋白酶混合消化法并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

6.质量检测：

实验室分离的人脑动脉血管内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

7.培养信息：

包被条件PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%）

培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

产品货号CM-H115

换液频率每2-3天换液一次

生长特性贴壁

细胞形态内皮细胞样

传代特性可传2-3代

消化液0.25%胰蛋白酶

培养条件气相：空气，95%；CO2，5%

产品特点:

1、 使用方便:不需昂贵设备。

2、 可以处理各种细菌菌体，包括新鲜菌液和冰冻菌体。

3、 将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。

4、 采用温和的中性裂解组分，保持蛋白活性。

5、 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。

6、 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。

7、 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。

8、 本试剂盒中不有EDTA，与金属螯和层析等兼容。

细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

一、冻存时的注意事项：

1. 在冷冻保存之前，应观察细胞生长是否良好(log phase) 且存活率高，冻存的细胞密度为80 – 90 ％最佳

2. 冷冻前检测细胞是否保有其*性质，例如是否有杂细胞或者支原体等。

3. 使用的DMSO 应为试剂级等级，以5~10 ml 小体积分装，4 度避光保存，勿作多次解冻。使用的甘油也应为试剂级等级，以高压蒸汽

灭菌后避光保存。在开启后一年内使用，因长期储存后对细胞会有毒性。

4. 冷冻保存的细胞浓度：

4-1. 正常的成纤维细胞: 1-3x 10^6 cells/ml

4-2 杂交瘤细胞: 1~3 x 10^6 cells/ml，细胞浓度不要太高，某些杂交瘤会因冷冻浓度太高而在解冻24 小时后。

4-3.贴壁肿瘤细胞: 1 x 10^6，依细胞种类而异。腺癌类的细胞解冻后须较高之浓度，而HeLa 只需1-3 x 10^6 cells/ml。

4-4. 悬浮细胞: 5~10 x 10^6 cells/ml, 而淋巴类细胞须至少5 x 10^6 cells/ml。

5. 冷冻保护剂浓度为5 %或10 ％ DMSO，若是不确定细胞之冷冻条件，在做冷冻保存之同时，亦应作一个backup culture，以防止冷冻失败。

收到细胞后，请按照以下方法进行操作。

1. 取出25cm2培养瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2细胞培养箱中静置6-8小时或者过夜，以稳定细胞状态。

2. 待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养。

3. 细胞传代

1) 吸出25cm2培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；

2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液约1mL至培养瓶中，37℃温浴3min左右；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后吸弃消化液，再加入*培养液终止消化；

3) 用吸管轻轻吹打混匀，按1:2或1:3等适当的比例进行接种传代，然后补充新鲜的*培养基至5mL，放入37℃，5% CO2细胞培养箱中培养；

4) 待细胞*贴壁后，培养观察。之后每隔2-3天更换新鲜的*培养基。