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大鼠软骨细胞

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产品厂地:上海市
更新时间:2025-02-19
厂商性质:经销商
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品牌其他品牌货号GOY-01X0985
规格5×10⁵Cells/T25培养瓶供货周期现货
主要用途产品仅供科研使用应用领域化工

产品属性: 

产品名称

规格

货号

大鼠软骨细胞

5×10⁵Cells/T25培养瓶

GOY-01X0985

商品介绍:

名称    大鼠软骨细胞 

2.组织来源:软骨组织

3.产品规格:5×105cells/T25细胞培养瓶

4.细胞简介:

大鼠软骨细胞分离自软骨组织;软骨组织由软骨细胞、基质及纤维构成。软骨组织再生能力强,这些增生的幼稚细胞形似纤维母细胞,以后逐渐变为软骨母细胞,并形成软骨基质,细胞被埋在软骨陷窝内而变为静止的软骨细胞。根据软骨组织内所含纤维成分的不同,可将软骨分为透明软骨、弹性软骨和纤维软骨三种,其中以透明软骨的分布较广,结构也较典型。软骨细胞(chondrocyte)位于软骨陷窝内。幼稚的软骨细胞位于软骨组织的表层,单个分布,体积较小,呈椭圆形,长轴与软骨表面平行,越向深层的软骨细胞体积之间增大呈圆形,细胞核圆形或卵圆形,染色浅,细胞质弱嗜碱性,常见数量不一的脂滴。成熟的软骨细胞多2-8个成群分布于软骨陷窝内,这些软骨细胞由同一个母细胞分裂增殖而成,称为同源细胞群。电镜下,软骨细胞有突起和皱褶,细胞质内有大量的粗面内质网和发达的高尔基复合体及少量的线粒体。在组织切片中,软骨细胞收缩为不规则形,在软骨囊和细胞之间出现较大的腔隙。体外培养的软骨细胞对于研究其生理功能、药物作用以及各种致病因素作用下的病理生理改变具重要意义。

5.方法简介:

实验室分离的大鼠软骨细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化制备而来,细胞总量约为5×10?cells/瓶。

6.质量检测:

实验室分离的大鼠软骨细胞型胶原蛋白免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1HBVHCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

7.培养信息:

培养基含FBS、生长添加剂、PenicillinStreptomycin

产品货号CM-R087

换液频率每3-4天换液一次

生长特性贴壁

细胞形态梭形、多角形

传代特性可传5代左右;3代以内状态最佳

消化液0.25%胰蛋白酶

培养条件气相:空气,95%CO25%

冷冻保存细胞之方法?

冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ (-20 ℃30 分钟*) → -80 ℃16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 长期储存。

冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时, 以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。

88.jpg

实验要点及说明:

1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法;

2.所使用的盖玻片应该为优质玻璃,并经过铬酸洗液处理;

3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻;

4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率;

5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

实验报告:

一、分离与培养:

1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,将成1mm3左右大小;

2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;

3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化;

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;

5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;

二、免疫荧光鉴定:

1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;

2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;

5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;

6、用PBS冲洗3次,每次10min,在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

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