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L-WRN(小鼠皮下结缔组织细胞)

产品简介

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产品厂地:上海市
更新时间:2025-02-18
厂商性质:经销商
访问量:371
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品牌其他品牌货号GOY-01X0641
规格1×10⁶cells/T25培养瓶供货周期现货
主要用途产品仅供科研使用应用领域化工

冷冻保存细胞之方法?

冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ (-20 ℃30 分钟*) → -80 ℃16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 长期储存。

冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时, 以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。

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产品属性:   

产品名称

规格

货号

L-WRN(小鼠皮下结缔组织细胞)

1×10⁶cells/T25培养瓶

GOY-01X0641

商品介绍:

名称    L-WRN(小鼠皮下结缔组织细胞)   

年龄(性别)100 days

生长特性贴壁细胞

细胞形态成纤维细胞样

背景描述L-WRN细胞通过R-spondin 3noggin共表达载体转染L-Wnt3A 获得,并在含有G418和湿霉素b的培养基中选择稳定克隆。

生物安全等级2

生长培养基DMEM10% FBS(164210-50)+0.5 mg/mL G-418+0.5 mg/mL hygromycin B1% P/S

推荐换液频率2~3/

冻存条件

冻存液:55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO

温度:液氮

培养条件

气相:空气,95%CO25%

 

实验要点及说明:

1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法;

2.所使用的盖玻片应该为优质玻璃,并经过铬酸洗液处理;

3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻;

4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率;

5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

实验报告:

一、分离与培养:

1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,将成1mm3左右大小;

2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;

3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化;

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;

5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;

二、免疫荧光鉴定:

1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;

2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;

5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;

6、用PBS冲洗3次,每次10min,在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

 ACTN3 基因全长ORF克隆

 ITGA3 基因全长ORF克隆

 Integrin alpha8 基因全长ORF克隆

 SOSTDC1 基因全长ORF克隆

 ME2 基因全长ORF克隆

 FTO 基因全长ORF克隆

 MUC1 转录变体2 基因全长ORF克隆

 ITGAX 基因全长ORF克隆

 ITGA4 基因全长ORF克隆

 CLEC3B 基因全长ORF克隆

L-WRN(小鼠皮下结缔组织细胞)31.2-2000 pg/mL 人白介素12(IL-12/P70)ELISA试剂盒

2.5-160 ng/mL ELISA Kit for Human Atrial natriuretic peptide receptor 2

78-5000 pg/mL 转基因植物PRSV基因核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)

0.78-50 ng/mL 人12-脂氧化/脂加氧(LOX-12)ELISA试剂盒

0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Sphingosine 1-phosphate receptor 1

0.312-20 ng/mL 人凝血因子Ⅺ(F11)ELISA试剂盒

15.6-1000 pg/mL 大豆特定基因序列(Lectin)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)

RV沙门菌增菌液体培养基(2015药典)(颗粒) 英文名称: 产品规格:250g

62.5-4000 pg/mL 人C1q TNF相关蛋白-1(CTRP1/C1QTNF1)ELISA试剂盒

0.312-20 ng/mL 人高迁移率族蛋白B2(HMGB2)ELISA试剂盒

 

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