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品牌 | 其他品牌 | 货号 | GOY-01X1265 |
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规格 | 5×10⁵Cells/T25培养瓶 | 供货周期 | 现货 |
主要用途 | 产品仅供科研使用 | 应用领域 | 化工 |
冷冻保存细胞之方法?
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ (-20 ℃30 分钟*) → -80 ℃16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时, 以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
产品属性:
产品名称 | 规格 | 货号 |
小鼠小肠Cajal间质细胞 | 5×10⁵Cells/T25培养瓶 | GOY-01X1265 |
商品介绍:
名称 小鼠小肠Cajal间质细胞 2.组织来源:小肠组织 3.产品规格:5×105cells/T25细胞培养瓶 4.细胞简介: 小鼠小肠Cajal间质细胞分离自小肠组织;小肠位于腹中,上端接幽门与胃相通,下端通过阑门与大肠相连,是食物消化吸收的主要场所。小肠盘曲于腹腔内,上连胃幽门,下接盲肠,分为十二指肠、空肠和回肠三部分。小肠内消化是至关重要的,因为食物经过小肠内胰液、胆汁和小肠液的化学性消化及小肠运动的机械性消化后,基本上完成了消化过程,同时营养物质被小肠粘膜吸收了。小肠管壁由粘膜、粘膜下层、肌层和浆膜构成。其结构特点是管壁有环形皱襞,粘膜有许多绒毛,绒毛根部的上皮下陷至固有层,形成管状的肠腺,其开口位于绒毛根部之间。绒毛和肠腺与小肠的消化和吸收功能关系密切;构成肠腺的细胞有柱状细胞、杯状细胞、潘氏细胞和未分化细胞。柱状细胞和内分泌细胞与绒毛上皮相似,接近绒毛的柱状细胞与吸收细胞相似,绒毛深部的柱状细胞微绒毛少而短,不形成纹状缘。Cajal间质细胞(ICC)是一类主要分布于胃肠道的间质细胞,是胃肠道的起搏细胞和信号传导细胞,与肌细胞以及末梢神经元有着紧密的关系,具有激发和促进胃肠蠕动的作用。借助于电子显微镜技术,清楚观察到了ICC位置分布和内部精细结构;应用免疫荧光等生化技术,发现了其特殊表达的c-kit蛋白;利用电生理技术,得知多种胃肠动力障碍疾病也与其异常有关。多年来,学者逐渐在胃肠道、胆道、膀胱、子宫等部位发现了ICC的踪迹,并试图阐述其与某些疾病的发生机制。 5.方法简介: 实验室分离的小鼠小肠Cajal间质细胞采用胶原酶消化法结合组织贴块法制备而来,细胞总量约为5×10?cells/瓶。 6.质量检测: 实验室分离的小鼠小肠Cajal间质细胞经c-kit免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 7.培养信息: 培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等 产品货号CM-M195 换液频率每2-3天换液一次 生长特性贴壁 细胞形态成纤维细胞样 传代特性可传1-2代 消化液0.25%胰蛋白酶 培养条件气相:空气,95%;CO2,5% |
实验要点及说明:
1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法;
2.所使用的盖玻片应该为优质玻璃,并经过铬酸洗液处理;
3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻;
4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率;
5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,将成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
TLR4 / CD284 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
大鼠 CLP1 / COLEC12 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
小鼠 Tie2 / TEK (aa 770-1122) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
小鼠 ENPEP / Aminopeptidase A 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
PSG6 / PSG10 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
MAX / MYC 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
IL17 / IL17A 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
STK40 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
nemo-like kinase / NLK 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
AMPK (G1/B1/A2) Heterotrimer 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
小鼠小肠Cajal间质细胞N,N'-二环己基碳二亚 CP,95.0% 乙酸 98%chloramphenicol/OVA 偶联鸡卵白蛋白蛋白
胍硝酸盐 99%D-泛 分析标准品Gentamicin/BSA 素偶联牛血清白蛋白
N-苄乙 96%D-泛 98%Gentamicin/OVA 素偶联鸡卵白蛋白
1,1-环丁烷二甲酸 99%DL-泛 99%Tetracycline/BSA 四环素偶联牛血清白蛋白
12-冠-4 98%化钙 CP,98%Gentamicin/FITC 荧光素标记素
二苯并-18-冠-6- 98%酸钙 SUTetracycline/OVA 四环素偶联鸡卵白蛋白
N-十二烷基-2-吡咯烷酮 99%酸钙 98%Oxytetracycline/BSA 土霉素偶联牛血清白蛋白
太古油 CP,70%氢酸 AR,≥47.0%Oxytetracycline/OVA 土霉素偶联鸡卵白蛋白