产品简介

SW480 [SW-480] (结肠癌细胞) 的相关*：细胞/组织活性高尔基体分离试剂盒 10次
细胞/组织高质纯化高尔基体分离试剂盒 10次
分离高尔基体纯度双法（GT/NCR）检测试剂盒 20次
细胞膜流动性（fluidity）荧光检测试剂盒 20次
血红细胞溶解液 500毫升
陈旧血红细胞溶解液 500毫升

名称    SW480 [SW-480] (结肠癌细胞)

别称SW-480; SW 480; SW480E

种属人类

年龄（性别）男性，50岁

组织来源直肠；结直肠腺癌

生长特性贴壁细胞

细胞形态上皮细胞样

背景描述SW480 [SW-480]细胞源自原位直肠腺癌，和SW620细胞源自同一病人一年后的淋巴结转移。CSAp和直肠抗体3阴性；角蛋白免疫过氧化物酶染色阳性。p53基因第273位密码子的G→A突变引起Arg→His替代，309位密码子的C→T突变导致Pro→Ser替代。细胞p53蛋白表达水平提高，癌基因c-myc、K-ras、H-ras、N-ras、myb、sis和fos的表达呈阳性，癌基因N-myc的表达未做检测。SW480 [SW-480]细胞不表达细胞溶解酶，一种与肿瘤入侵相关的金属蛋白酶。有报道称，SW480 [SW-480]细胞表达GM-CSF。SW480 [SW-480]细胞ras原癌基因的12位密码子有一个突变，可以用作PCR法检测该突变的阳性对照。1978年11月，A·Leibovitz将其提交给ATCC时已传代至第91代。

生物安全等级1

生长培养基Leibovitz's L-15＋10% FBS＋1% P/S

推荐传代比例1:2-1:4

推荐换液频率2~3次/周

倍增时间~30-50小时

冻存条件

冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO

温度：液氮

培养条件

气相：空气，100%

温度：37℃

致瘤性Yes. Tumors developed within 21 days at 100% frequency (5/5) in nude mice inoculated subcutaneously with 1×10^7 cells.

受体表达情况epidermal growth factor (EGF)

基因表达情况carcinoembryonic antigen (CEA) 0.7 ng/10^6 cells/10 days; keratin; transforming growth factor beta, myc+; myb+ ; ras+; fos+; sis+; p53+; abl -; ros -; src -, HLA A2, B8, B17; Blood Type A; Rh+, The cells are positive for keratin by immunoperoxidase staining., The line is positive for expression of c-myc, K-ras, H-ras, N-ras, myb, sis and fos oncogenes.

注意事项1、该细胞推荐使用Leibovitz's L-15培养基进行培养，Leibovitz's L-15不可以通入二氧化碳，会产生细胞毒性； 2、该细胞不建议更换为DMEM培养，圆形较多，效果不好。

产品名称

产品特点:

1、 使用方便:不需昂贵设备。

2、 可以处理各种细菌菌体，包括新鲜菌液和冰冻菌体。

3、 将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。

4、 采用温和的中性裂解组分，保持蛋白活性。

5、 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。

6、 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。

7、 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。

8、 本试剂盒中不有EDTA，与金属螯和层析等兼容。

细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

一、冻存时的注意事项：

1. 在冷冻保存之前，应观察细胞生长是否良好(log phase) 且存活率高，冻存的细胞密度为80 – 90 ％最佳

2. 冷冻前检测细胞是否保有其*性质，例如是否有杂细胞或者支原体等。

3. 使用的DMSO 应为试剂级等级，以5~10 ml 小体积分装，4 度避光保存，勿作多次解冻。使用的甘油也应为试剂级等级，以高压蒸汽

灭菌后避光保存。在开启后一年内使用，因长期储存后对细胞会有毒性。

4. 冷冻保存的细胞浓度：

4-1. 正常的成纤维细胞: 1-3x 10^6 cells/ml

4-2 杂交瘤细胞: 1~3 x 10^6 cells/ml，细胞浓度不要太高，某些杂交瘤会因冷冻浓度太高而在解冻24 小时后。

4-3.贴壁肿瘤细胞: 1 x 10^6，依细胞种类而异。腺癌类的细胞解冻后须较高之浓度，而HeLa 只需1-3 x 10^6 cells/ml。

4-4. 悬浮细胞: 5~10 x 10^6 cells/ml, 而淋巴类细胞须至少5 x 10^6 cells/ml。

5. 冷冻保护剂浓度为5 %或10 ％ DMSO，若是不确定细胞之冷冻条件，在做冷冻保存之同时，亦应作一个backup culture，以防止冷冻失败。

收到细胞后，请按照以下方法进行操作。

1. 取出25cm2培养瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2细胞培养箱中静置6-8小时或者过夜，以稳定细胞状态。

2. 待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养。

3. 细胞传代

1) 吸出25cm2培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；

2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液约1mL至培养瓶中，37℃温浴3min左右；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后吸弃消化液，再加入*培养液终止消化；

3) 用吸管轻轻吹打混匀，按1:2或1:3等适当的比例进行接种传代，然后补充新鲜的*培养基至5mL，放入37℃，5% CO2细胞培养箱中培养；

4) 待细胞*贴壁后，培养观察。之后每隔2-3天更换新鲜的*培养基。