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小鼠肝枯否细胞

产品简介

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产品厂地:上海市
更新时间:2025-02-17
厂商性质:经销商
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品牌其他品牌货号GOY-01X1099
规格5×10⁵Cells/T25培养瓶供货周期现货
主要用途产品仅供科研使用应用领域化工

冷冻保存细胞之方法?

冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ (-20 ℃30 分钟*) → -80 ℃16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 长期储存。

冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时, 以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。

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产品属性:   

产品名称

规格

货号

小鼠肝枯否细胞

5×10⁵Cells/T25培养瓶

GOY-01X1099

商品介绍:

名称    小鼠肝枯否细胞   

2.组织来源:肝脏组织

3.产品规格:5×105cells/T25细胞培养瓶

4.细胞简介:

小鼠枯否细胞分离自肝脏组织;肝脏是身体内以代谢功能为主的一个器官,并在身体里面起着去氧化、储存肝糖、分泌性蛋白质的合成等作用;肝脏也消化系统中之胆汁。肝脏是机体内脏里最大的器官,位于机体中的腹部位置,在右侧横隔膜之下,位于胆囊之前端且于右边肾脏的前方,胃的上方。肝脏是机体消化系统中最大的消化腺,为一红棕色的V字形器官。肝脏是尿素合成的主要器官,又是新陈代谢的重要器官。肝脏在机体位置和形态结构:肝脏位于右上腹,隐藏在右侧膈下和肋骨深面,大部分肝为肋弓所复盖,仅在腹上区、右肋弓间露出并直接接触腹前壁,肝上面则与膈及腹前壁相接。枯否氏细胞(Kupffer细胞)是肝脏的肝血窦内一些固定于窦壁的巨噬细胞,它能吞噬和清除大部分从肠道来的抗原微粒,并能吞噬和清除肝血窦中的细菌、异物和衰老的红细胞,并把血红蛋白分解成胆红素。此外,肝巨噬细胞也有处理抗原,诱导T细胞增殖,参与免疫调节的作用。枯否氏细胞和一般巨噬细胞不同,枯否氏细胞不具有增加抗原免疫原性的能力,相反有消除或减弱抗原性的作用。枯否氏细胞能吞噬来自血液循环的抗原抗体复合物和其他有害物质,以消除这些物质对机体的损害。枯否细胞功能障碍可导致肠源性内毒素血症。电镜下有很多皱褶和微绒毛。

5.方法简介:

实验室分离的小鼠肝枯否细胞采用混合酶灌流消化、低速离心、密度梯度离心、差速贴壁法制备而来,细胞总量约为5×10?cells/瓶。

6.质量检测:

实验室分离的小鼠肝枯否细胞CD68免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1HBVHCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

7.培养信息:

培养基含FBS、生长添加剂、PenicillinStreptomycin

产品货号CM-M132

换液频率每2-3天换液一次

生长特性贴壁

细胞形态梭形、巨噬细胞

传代特性属于终末分化细胞;属于不增殖细胞群

培养条件气相:空气,95%CO25%

 

实验要点及说明:

1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法;

2.所使用的盖玻片应该为优质玻璃,并经过铬酸洗液处理;

3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻;

4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率;

5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

实验报告:

一、分离与培养:

1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,将成1mm3左右大小;

2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;

3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化;

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;

5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;

二、免疫荧光鉴定:

1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;

2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;

5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;

6、用PBS冲洗3次,每次10min,在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

 FGFR2 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带FLAG标签

 ApoE 基因全长ORF克隆 (表达载体), 无标签

 PLAU / UPA 基因全长ORF克隆 (表达载体), 无标签

 AKT1 基因全长ORF克隆 (表达载体), 无标签

 EphB2 基因全长ORF克隆 (表达载体), 无标签

 EphB2 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带FLAG标签

 SRC Kinase / Proto-oncogene c-Src 基因全长ORF克隆 (表达载体), 无标签

 MMP-14 基因全长ORF克隆 (表达载体), 无标签

 APP / PN2 转录变体2 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带FLAG标签

 CD26 / DPP-IV 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带FLAG标签

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