犬免疫球蛋白G（IGG）elisa试剂盒使用说明书

犬免疫球蛋白G（IGG）elisa试剂盒试验原理 

本试剂盒采用的是生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定样品中犬免疫球蛋白G(IGG)的水平。向预先包被了犬免疫球蛋白G(IGG)单克隆抗体的酶标孔中加入免疫球蛋白G(IGG)，温育；温育后，加入生物素标记的抗IGG抗体，再与链霉亲和素-HRP结合，形成免疫复合物，再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物A、B，产生蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅与样品中犬免疫球蛋白G(IGG)的浓度呈正相关。

标本要求
1．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
犬免疫球蛋白G（IGG）elisa试剂盒操作程序
标准品的稀释：（本试剂盒提供原倍标准品一支，用户请按照说明自行在小试管中倍比稀释）：
480μg/ml
（5号标准品）
120μl的原倍标准品加入120μl的标准品稀释液
240μg/ml
（4号标准品）
120μl的5号标准品加入120μl的标准品稀释液
120μg/ml
（3号标准品）
120μl的4号标准品加入120μl的标准品稀释液
60μg/ml
（2号标准品）
120μl的3号标准品加入120μl的标准品稀释液
30μg/ml
（1号标准品）
120μl的2号标准品加入120μl的标准品稀释液
根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。
加样：1）空白孔：空白对照孔不加样品，生物素标记的抗IGG抗体，链霉亲和素-HRP，只加显色剂A&B和终止液，其余各步操作相同；2）标准品孔：加入标准品50μl，链霉素-HRP50μl（标准品中已事先整合好生物素抗体，故不加）；3)待测样品孔:加入样本40μl，然后各加入抗- IGG抗体10μl、链酶亲和素-HRP50μl，盖上封板膜，轻轻振荡混匀，37℃温育60分钟。
配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
显色：每孔先加入显色剂A 50μl，再加入显色剂B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟。
终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后10分钟以内进行。
9.根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。犬免疫球蛋白G（IGG）elisa试剂盒也可以使用各种应用软件来计算。