如何判断一个组织是否适合作为阴性对照

判断阴性对照组织是否合适，关键看它是否能‌明确排除非特异性染色‌。以下是具体方法：

一、基因敲除样本

‌操作‌：用基因敲除（KO）或敲低（KD）的组织，比如CD4检测用CD4-KO小鼠。

‌优势‌：结果可靠，能直接排除抗体交叉反应。

二、备选天然低表达组织

‌操作‌：查找目标蛋白低表达的组织。

‌示例‌：PD-L1检测用正常肺组织。

三、关键操作要点

‌同步处理‌：和实验组用同一批固定液、同种修复方法。

‌验证‌：若阴性对照显色，可能是抗体交叉反应或封闭不充分。

‌记录‌：标注组织来源和处理条件，方便追溯。

四、常见问题

‌假阳性‌：阴性对照显色→排查抗体特异性或封闭步骤。

‌假阴性‌：阴性对照未显色→检查抗体效价或显色试剂。