酶免elisa试剂盒广泛应用于科研与临床检测，其高灵敏度也意味着对操作细节敏感，微小的偏差即可导致标准曲线异常、背景升高或重复性差。为确保
酶免elisa试剂盒结果准确可靠，使用者必须严格遵循规范，尤其注意以下关键事项。
1、严格控温与平衡
所有试剂（尤其是酶标抗体和底物）使用前需在室温（18-25℃）平衡30分钟。温度波动会显著影响抗原-抗体结合效率及酶反应速率，导致OD值漂移。
2、避免反复冻融标准品与抗体
标准品和检测抗体应按单次用量分装，-20℃保存，严禁反复冻融。每次取用后立即放回freezer，防止蛋白变性失活。
3、精准加样，杜绝交叉污染
使用经校准的移液器，配合低吸附枪头。每加一种试剂更换新枪头；切勿将已吸取的试剂倒回原瓶；避免枪头触碰孔壁或液面，防止非特异吸附。
4、洗板到位且一致
洗板是降低背景的关键。使用自动洗板机时，确保每孔注满洗涤液（通常300-400μL），浸泡30秒后再吸干；手工洗板需重复5次以上，并在吸水纸上拍干（勿擦拭），避免残留液体稀释后续试剂。
5、显色反应严控时间与避光
TMB等显色底物对光敏感，显色过程需避光进行。严格按照说明书控制显色时间（通常10-30分钟），到时立即加入终止液（如2MH?SO?），否则颜色持续加深，线性丧失。
6、标准曲线必须同步制备
每次实验都需新鲜配制标准品梯度，并与待测样本同板检测。不同批次或不同板间的标准曲线不可互换，否则定量无效。
7、样本预处理不可忽视
血清/血浆样本需充分离心（≥1500×g，10分钟）去除颗粒；高脂或溶血样本可能干扰检测，必要时稀释或过滤。组织匀浆液需离心取上清，避免细胞碎片堵塞孔底。
8、合理设置对照组
必须包含：空白孔（仅加缓冲液）、零标准孔、阳性/阴性对照（若提供）。这些对照用于验证系统有效性、计算背景扣除及判断实验是否成功。
更新时间：2025-11-24
点击次数：0
当前位置：
ELISA试剂盒
