BIU-87人膀胱癌细胞实验操作步骤

BIU-87人膀胱癌细胞实验操作步骤

细胞传代与扩增

当细胞密度达到80%-90%时，需进行传代操作。弃去旧培养基，用预冷的PBS轻柔洗涤2次以去除残留血清。加入1 mL 0.25%胰蛋白酶（含EDTA），37℃孵育1-2分钟，显微镜下观察细胞回缩变圆后，立即加入含血清的培养基终止消化。吹打制成单细胞悬液，按1:3至1:5比例分装至新培养瓶，补充适量培养基后置于孵箱继续培养。注意记录传代次数，避免细胞状态因过度传代而下降。

细胞冻存与复苏

冻存：取对数生长期细胞，消化离心后弃上清，用预冷的冻存液（90%血清+10%DMSO）重悬至1×10⁶/mL，分装至冻存管，标记细胞名称、代次及日期。程序性降温：4℃ 30分钟→-20℃ 2小时→-80℃过夜，最后转入液氮长期保存。

复苏：从液氮中快速取出冻存管，37℃水浴震荡至融化，酒精消毒后转移至15 mL离心管，缓慢加入5 mL预温培养基，离心去除DMSO。沉淀用新鲜培养基重悬，接种至培养瓶，24小时后更换培养基以去除死细胞碎片。

实验质量控制

- 无菌操作：超净台需提前紫外灭菌30分钟，操作中避免手部跨越开放容器。

- 交叉污染排查：定期通过STR鉴定确认细胞株身份，显微镜下观察形态是否均一。

- 数据记录：详细记录接种密度、处理时间及异常现象（如颗粒增多、空泡化等）。

‌常见问题与解决方案

- 生长缓慢：检查血清批次活性或调整接种密度。

- 污染处理：若出现真菌污染（菌丝状漂浮物），立即废弃培养物并用0.1%过氧乙酸清洁孵箱。