小鼠肝星状细胞永生化细胞专用培养基操作注意事项

小鼠肝星状细胞永生化细胞专用培养基的操作需严格遵循无菌规范，以确保细胞活性和实验数据的可靠性。以下为关键注意事项的补充说明：

**培养基预处理**

解冻后的培养基需在4℃避光保存，使用前应恢复至室温（25±2℃），避免温度骤变导致蛋白沉淀。若发现絮状物，需立即以1000rpm离心5分钟去除杂质，切勿直接过滤，以防生长因子损失。

**补液策略优化**

换液时建议保留原培养基30%-50%，尤其在高密度培养阶段（细胞融合度＞80%），可减少细胞应激。添加5mM谷氨酰胺增强剂时，需分次混匀（每次添加1ml震荡10秒），避免局部浓度过高。

** 气体平衡控制**

使用三气培养箱（5% CO₂/5% O₂/90% N₂）时，需预先平衡培养基2小时，pH值稳定在7.4±0.2。开放式操作需在厌氧工作站内完成，单次暴露时间不超过3分钟。

** 污染监测方案**

每周用0.1μm孔径滤膜过滤储备液，并采用PCR法检测支原体（建议选用16S rRNA通用引物）。若细胞出现伪足回缩等异常形态，可添加1%双抗-抗真菌复合剂（含两性霉素B 2.5μg/ml）应急处理。

** 冻存适配调整**

使用该培养基制备冻存液时，需将DMSO浓度降至8%，并添加10%海藻糖作为低温保护剂。程序降温阶段应以-1℃/min速率降至-80℃，再转入液氮保存。