小鼠β防御素elisa检测试剂盒试剂​配制

小鼠β防御素elisa检测试剂盒试剂配制:

1、小鼠β防御素elisa检测试剂盒说明书酶联板（Assay plate ）：一块（96孔或者48孔）。

2、标准品（Standard）：2瓶（冻干品）。

3、样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。

4、生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。

5、辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。

6、生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）

7、辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）

8、底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。

9、浓洗涤液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。

10、终止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。

【实验用途】β-Defensin，β－防御素。β-Defensin是一种富含半胱氨酸阳离子多肽，含有 6个稳定的半胱氨酸，分别以 l－6，2－4，3一5连接形成三个分子的二硫键，构成稳定的反相平行的三股β一片层结构。二流键可以使小分子防御素紧密联结以防御蛋白酶水解，所以在富含蛋白的吞噬溶酶体环境中仍能保持其特性，这也是防御素区别与其他抗微生物肽的主要因素。pBD－1除上述结构外，还含有2个精氨酸、7个赖氨酸，且在成熟的肽中不含有阴离子残基。预先包被的β-Defensin（β－防御素）抗体为多克隆β-Defensin（β－防御素）抗体。检测相β-Defensin（β－防御素）抗体也为多克隆β-Defensin（β－防御素）抗体，经生物素（biotin）标记。样品和生物素标记β-Defensin（β－防御素）抗体先后加入酶标板孔反应后，PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应；经过PBS或TBS的*洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测因子呈正相关。

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