组织相容性抗原HLAF抗体的生物素化标记实验要点

组织相容性抗原HLAF抗体的生物素化标记实验要点：

1.如在反应混合液中有叠氮钠或游离氨基存在,会抑制标记反应。因此,蛋白质在反应前要对 0.1mol/L碳酸氢钠缓冲液或0.5mol/L硼酸缓冲液充分透析；
2.所用的NHSB及待生物素化蛋白质之间的分子比按蛋白质表面的ε-氨基的密度会有所不同,选择不当则影响标记的效率,应先用几个不同的分子比来筛选最适条件；
3.用NHSB量过量也是不利的,抗原的结合位点可能因此被封闭,导致抗体失活；
4.由于抗体的氨基不易接近可能造成生物素化不足,此时可加入去污剂如 Triton x-100, Tween20等；
5.当游离ε-氨基(赖氨酸残基的氨基)存在于抗体的抗原结合位点时,或位于酶的催化位点时,生物素化会降低或损伤抗体蛋白的结合力或活性；
6.生物素还可能与不同的功能基团,如羰基、氨基、巯基、异咪唑基及苯酚基,也可与糖基共价结合；
7.交联反应后,应充分透析,否则,残余的生物素会对生物素化抗体与亲和素的结合产生竞争作用；
8.在细胞的荧光标记实验中,中和亲和素的本底低,但由于链霉亲和素含有少量正电荷,故对某些细胞可导致高本底。

磷酸化Ack1抗体
磷酸化腺苷单磷酸活化蛋白激酶α1抗体
磷酸化腺苷单磷酸活化蛋白激酶β1抗体
磷酸化间变型淋巴瘤激酶抗体
磷酸化毛细血管扩张性共济失调症突变蛋白抗体
磷酸化三磷酸腺柠檬酸裂解酶抗体
磷酸化ATR抗体
细胞核重定位及纺锤体检查点蛋白AMN1抗体
天门冬酰胺连接糖基化11抗体
细胞衰老相关蛋白ASF1A抗体
氨基糖苷类磷酸结构域蛋白抗体
唾液酸糖蛋白受体1抗体
芳香基硫酸酯酶F抗体
A激酶锚定蛋白5抗体
小脑脊髓共济失调蛋白3抗体
ASTE1蛋白抗体
磷酸化自噬相关蛋白4B抗体
微丝相关蛋白1抗体
腺苷A1A受体抗体
芳基硫酸酯酶B抗体
γ氨基丁酸转氨酶抗体
共济失调蛋白2结合蛋白1抗体
肿瘤坏死因子α转换酶